что делать если один пцр положительный а другой отрицательный
Нужно ли сидеть на карантине, если анализы на COVID-19 противоречат друг другу?
Я попала в больницу, и мне в общем порядке сделали два теста на коронавирус: взяли кровь на антитела и мазок на ПЦР. Через два дня пришли результаты: анализ на кровь показал, что болезнь в самом разгаре, а ПЦР оказался отрицательным. Нужно ли в такой ситуации сидеть на карантине и сколько?
Окончательное решение в такой ситуации всегда принимают доктора: пока вы в больнице, за ваше здоровье отвечает лечащий врач из отделения, а если болеете дома — участковый терапевт из поликлиники.
Но если у вас нет никаких симптомов, а результат ПЦР-теста отрицательный, скорее всего, карантина не будет. В декабре 2020 года мне тоже сделали ПЦР-тест и анализ на антитела, и они показали разные результаты. Расскажу, что мне удалось узнать о юридических и медицинских аспектах этой проблемы.
Будьте внимательны к источникам информации о здоровье — и сходите к врачу
Наши статьи написаны с любовью к доказательной медицине. Мы ссылаемся на авторитетные источники и ходим за комментариями к докторам с хорошей репутацией. Но помните: ответственность за ваше здоровье лежит на вас и на лечащем враче. Мы не выписываем рецептов, мы даем рекомендации. Полагаться на нашу точку зрения или нет — решать вам.
Чем отличается анализ крови на антитела и мазок на ПЦР
Существует два анализа на ковид: ПЦР-тест и анализ на антитела. О том, как берут эти анализы и что именно с их помощью можно установить, мы подробно писали в статье «Как сдать анализы на коронавирусную инфекцию». Поэтому напомню вкратце самое главное.
Анализ на антитела. Антитела — это белки плазмы крови, иммуноглобулины, с помощью которых организм борется с инфекцией. Антитела могут присутствовать в организме во время болезни, какое-то время после нее или остаться на всю жизнь. Поэтому с помощью анализа на антитела можно узнать, что человек переболел COVID, или заподозрить, что он болеет прямо сейчас.
Интерпретация результатов теста на COVID-19 — Министерство здравоохранения ИспанииPDF, 720 КБ
ПЦР-тест и анализ на антитела могут показать разные результаты, так как ищут в организме разные элементы: первый — частицы вируса, второй — реакцию иммунитета на вирус. Если провести аналогию с детективами, ПЦР-тест позволяет поймать самого преступника, а анализ на антитела — только собрать улики с места преступления.
Какой анализ приоритетнее
Если сдавать два теста одновременно, можно получить один из трех результатов.
ПЦР-тест и анализ на антитела не противоречат друг другу. Если ПЦР-тест положительный и анализ на антитела показывает активное течение болезни, то нужно лечиться и сидеть на карантине.
ПЦР-тест положительный, а анализ на антитела не определяет активное течение болезни. Такое бывает в первые две недели заболевания. В это время высока вероятность ложноотрицательного результата анализа на антитела: вирус в организме есть, но иммунная система еще не успела выработать достаточное количество иммуноглобулинов.
В такой ситуации положительный результат ПЦР-теста приоритетнее и COVID-19 считается подтвержденным. Больной должен находиться на карантине, а врачи из поликлиники по месту жительства — его навещать. Об этом врачей автоматически уведомит Роспотребнадзор.
ПЦР-тест отрицательный, а анализ на антитела определяет активное течение болезни. Бывает, что и ПЦР-тест дает ложноотрицательный результат — показывает, что вируса в организме нет, хотя на самом деле человек болен.
Ученые предполагают, что количество ложноотрицательных результатов ПЦР может достигать 40%. Такое возможно, когда вирус успел спуститься в нижние дыхательные пути, а в носу или в горле его уже не осталось.
В такой ситуации врачи не ставят диагноз COVID-19 только исходя из результата анализа на антитела: непосредственное наличие вируса в организме он не определяет. Решение об изоляции пациента могут принять на основании симптомов и результатов дополнительных обследований, например КТ. Если они указывают на наличие болезни, нужно будет соблюдать карантин.
Как победить выгорание
Если человек сдал только один анализ
Иногда пациенты сдают только один анализ на коронавирусную инфекцию. Если его результаты указывают на наличие болезни, решение о карантине зависит от того, какой тест вы сдавали и есть ли у вас симптомы болезни.
В моем случае оба анализа брали в один день: врачи заподозрили диагноз по антителам, но через несколько часов отрицательный результат ПЦР-теста опроверг подозрения.
Тем не менее данные о моем положительном анализе на антитела все равно попали в общую городскую базу. Расскажу, у каких служб есть доступ к ней и чем могут помочь пациентам.
Чего ждать от государственных служб, если анализ положительный
Как только лаборатория получает данные о любом положительном анализе на коронавирус — ПЦР-тесте или анализе на антитела, — она обязана сообщить об этом в Роспотребнадзор. После этого данные пациента заносят в специальную базу, с которой дальше взаимодействуют несколько разных служб, а от самого пациента требуется только сохранять спокойствие, ждать врача и отвечать на телефонные звонки.
Я живу в Москве, поэтому мне звонили из двух московских организаций: оперативного штаба по контролю и мониторингу ситуации с коронавирусом в Москве и департамента здравоохранения города. Сотрудники оперштаба звонят только один раз: информируют больного о положительном результате анализа и уточняют место пребывания, чтобы отправить к нему участкового терапевта. После этого каждый день в течение 14 дней звонят сотрудники департамента здравоохранения: просят сообщить температуру тела и перечислить все дополнительные симптомы, которые появляются. Если больному станет хуже, информацию об этом сразу передадут участковому терапевту, чтобы тот смог вовремя скорректировать лечение.
Телефонные операторы не могут назначить больному карантин. Дело в том, что карантин по коронавирусу — это не просто обещание сидеть дома, а особый режим, за несоблюдение которого предусмотрена ответственность по закону. Вот кто должен его соблюдать:
Диагноз COVID-19 считается подтвержденным в двух случаях: если человек получил положительный результат ПЦР-тестирования или если диагноз установил врач по совокупности симптомов и дополнительных обследований, таких, например, как высокая температура, одышка и результаты КТ.
В Москве за соблюдением карантина следят в автоматическом режиме с помощью приложения «Социальный мониторинг». Установить приложение должны пациенты и те, кто с ними живет. Об обязанности установить приложение врачи уведомляют специальными документами: согласием на лечение дома или постановлением санитарного врача о самоизоляции. Один из этих документов врач приносит пациенту домой, когда приходит на осмотр.
«Социальный мониторинг» — официальный сайт мэра Москвы
Как быть, если дома ребенок, который ходит в детский сад или школу
Срок карантина для ребенка зависит от того, где находится заболевший родитель. Если он лечится в больнице, ребенок должен соблюдать карантин 14 дней с даты последнего контакта с заболевшими мамой или папой. Если дома — 14 дней считаются с момента выздоровления родителя. Чтобы вернуться в учебное учреждение после карантина, анализы на коронавирус сдавать не нужно — достаточно обычной справки от участкового педиатра, что ребенок здоров.
Если ребенок вообще не виделся с родителем в последние 14 дней, карантин соблюдать не нужно. Чтобы воспитатели и учителя допустили ребенка к занятиям, нужно принести заявление родителей, что ребенок не контактировал с больными в последние 14 дней. Такое же заявление нужно, если диагноз у родителя не подтвердится.
Что в итоге
Эта статья не может гарантировать, что вам точно не нужно сидеть на карантине. Решение об этом принимают врачи: лечащий доктор в стационаре, если результаты анализов вы узнали в больнице, или участковый терапевт из поликлиники, если вы находились дома. Вот что может повлиять на решение врачей.
Что делать? Читатели спрашивают — эксперты Т—Ж отвечают
Лайфхак тем, кто не очень то жаждет заморачиваться с приложением Социальный мониторинг. Достаточно позвонить им и сказать, что нет устройства, на которое это приложение можно установить. Тогда они будут должны выдать вам устройство с приложением. Только вот проблема в том, что устройств не так уж и много. Мне его так и не привезли.
Причем пару раз звонили и выясняли, почему я не установил приложение. Когда говорил, что мне его ставить некуда, а устройство еще не привезли, то спрашивали номер заявки на устройство и отваливали.
Честно, впечатление как будто тест берут для галочки и даже не проверяют
Script, аналогичная ситуация
Script, запахи(вернее их пропажа) не показатель наличия заболевания. Ни в первый раз, ни во второй запахи не пропадали. А вернее сказать, при заложенности наступало обострение восприятия запахов.
ПЦР тест это быстро и дёшево, у него большая погрешность и много переменных, к примеру если перед ним вы выпили воды, жевали жевачку или закапали в нос, он скорее всего будет испорчен и днк вируса не будут найдены.
Кровь наиболее точный вариант дающий ответ о наличии вируса и стадии, наличия М антител по умолчанию говорит о активной фазе и размножении вируса, но если бы вместе с M у вас бы нашли G > 10 то организм в достоянной мере подовлял бы вирус и вы не были бы распространителем с точки зрения металологии расчета.
Ваше личное ощущение и отсутствии температуры не существенны.
Жесткий социальный карантин накладывается и в отношении других социально опасных заболеваний, к примеру при Кори, и ее вспышки могут целый подъезд многоквартирного дома закрыть.
Александр, IgM дают положительный результат тогда, когда это уже почти бесполезно — человек перестает быть заразным через 7-10 дней как правило. ПЦР вполне точен если нормально брать.
Светлана, я статью врача читала, который писал о том, что теоретически это возможно. Но не в организме, а именно на слизистой носа, т.к. при местном иммунитете работают другие антитела, нежели в крови, а их выработку прививка не стимулирует.
Шанс такого «счастливого» совпадения невелик, но все же привитым стоит носить маску.
За ваше здоровье отвечаете только вы. Разбирайтесь и сомневайтесь в всём. Всё спрашивайте. Это ваша жизнь. Не перекладывайте ответственность на других.
Добрый день. Я сдала тест на антитела и у меня показало превышение IgM 2,25. Симптомов заболевания у меня не было. Спустя 2 дня ко мне пришел врач и взял у меня ПЦР тест. И сказал что я должна подписать бумагу, что обязуюсь находиться на карантине не менее 14 дней. ПЦР у меня оказался отрицательный. Но врач в результате осмотра поставил диагноз «Ковид подтвержден» Я пробовала звонить в поликлинику, что бы меня сняли с карантина досрочно, так как ПЦР отрицательный, а симптомов заболевания у меня нет. Но со мной даже разговаривать не стали. Сказали у них приказ с РосПотребНадзора. Сегодня 11 день карантина, симптомы итак и не появились. А врачи так и не пришли взять повторный ПЦР тест. Могу я выйти на улицу когда карантин закончится, если врачи ко мне так и не придут?
Добрый день. Я сдала тест на антитела и у меня показало превышение IgM 2,25. Симптомов заболевания у меня не было. Спустя 2 дня ко мне пришел врач и взял у меня ПЦР тест. И сказал что я должна подписать бумагу, что обязуюсь находиться на карантине не менее 14 дней. ПЦР у меня оказался отрицательный. Но врач в результате осмотра поставил диагноз «Ковид подтвержден» Я пробовала звонить в поликлинику, что бы меня сняли с карантина досрочно, так как ПЦР отрицательный, а симптомов заболевания у меня нет. Но со мной даже разговаривать не стали. Сказали у них приказ с РосПотребНадзора. Сегодня 11 день карантина, симптомы итак и не появились. А врачи так и не пришли взять повторный ПЦР тест. Могу я выйти на улицу когда карантин закончится, если врачи ко мне так и не придут?
У меня 3 детей.У средней дочери 2 раза подряд приходили положительные, были на карантине, только сегодня вышли. Брали мазки в понедельник у всех детей и у старшей пришёл положительный, а у остальных отрицательный. Можно ли с отрицательным выходить на улицу и ходить в детский сад.
Заболела 19 сентября. 1-ый день болезни. Не простужалась, свое заболевание связываю, с тем что в магазине были больные люди, которые очень кашляли. Поднялась температура до 38. Начала прием антибиотиков Амоксицилин 500 мг. 2 раза в сутки. Температура до 38 в течение первых 3 дней поднималась только утром и вечером.
23 сентября 5ый день болезни. Пропало обоняние и вкус, появилась мокрота раздирающая легкие. В четверг 23 сентября через портал Госуслуги вызвала врача на дом. Дрыгин А.М. пришел, послушал, выписал рецепт на антибиотики (Левофлоксацин и Цифтриаксон) – сказал принимать 5 дней левофлоксацин, есть станет хуже начать колоть цифтриаксон, записал на ПЦР тест и ушел. Спросил, есть ли таблетки противовирусные и витамин С. Сказал, что завтра придет медсестра, ждите. Мои симптомы: тошнота, рвота, диарея, пропал полностью аппетит, появился сильный удушающий кашель с мокротой розово-оранжевого цвета. Кашель не давал вздохнуть, спать. Общее состояние ухудшилось.
25 сентября. 7-ой день болезни. Общее состояние ухудшилось. Прекратила есть, т.к.к рвота. Из-за тошноты и рвоты не могла принимать таблетки. Сильная боль в спине ниже лопаток. Обратилась за советом в Минздрав Саратовской области через соцсеть Инстаграм, почему уже 9 день болезни, никто на пришел взять ПЦР тест.
26 сентября. Больна 8-й день. Температура 38.1. Температура поднимается 4 раза в сутки, сильная слабость. Нарушение вкуса, потеря аппетита, есть не могу. Пить не могу, таблетки принимать не могу. Вызвала скорую помощь. Поднялась температура до 38,3. Приняла жаропонижающие. К вечеру приехала скорая помощь. Температура была нормальной. Сильный кашель. Сотрудник скорой помощи, сказал обязательно сделать рентген, но в больницу не забрал, т.к. сказал, что есть пациенты еще более тяжелее чем вы. Назначил таблетки против тошноты, сказал надо кушать через силу, чтобы принимать таблетки и антибиотики.
27 сентября. Больна 9-й день. Состояние как и прежде, очень тяжелое, сильная слабость. Температура поднималась 4 раза в сутки. Кашель с розово-оранжевой мокротой, пена вместо слюней. Появились панические страхи, сильная боль в спине и груди, не могу засыпать ночью (засыпаю сидя на 2 часа и все). В 12 часов пришла медсестра взять ПЦР тест. Не спросила, кушала ли я и принимала ли я лекарства. Да, я принимала лекарства и ела перед этим. Взяли мазки, про мокроту ничего не спросили. Не сказали, когда будет готов и где узнать о результатах. Температура поднимается 4 раза в сутки.
29 сентября. Больна 11-й день. Температура поднимается 4 раза в день. Обоняния и вкуса нет. Боль при кашле увеличилась в двое. Кашель не давал ни вздохнуть, ни дышать. Каждый спазм волной выворачивал весь организм. Т.к. от удушающего кашля доктор ничего не прописал, я позвонила в приемную к главному врачу БСМП и со слезами на глазах попросила о помощи, хотя бы удаленно подсказать, какие действенные принимать лекарства от кашля. Секретарь записала и сказала, что мне позвонит врач и скорректирует лечение. К вечеру пришел участковый терапевт Дрыгин А.М. Послушал легкие, сказал делать уколы Цифтриаксона. Спросила его про лечение удушающего кашля. Ответил, чтобы сама в аптеке выбрала. Ни я, ни мой муж к медицине никакого отношения не имеем и не знаем какие надо назначать и покупать препараты! Начала делать уколы цифртиаксона.
30 сентября. Больна 12-й день. Ночью появились панические атаки. Давление 140/110, пульс 105. Температура 38,1 поднимается 4 раза в сутки. Сбиваю парацетомолом. Сильный удушающий кашель с розовой мокротой, пена вместо слюней. Написала смс сообщение лечащему доктору эндокринологу у которого наблюдаюсь по заболеванию АИТ тиретоксикоз, эндокринная офтальмопатия. Пригласила меня в поликлинику для сдачи анализа крови и гормонов. Записалась на прием к терапевту Дрыгину на 4 октября.
1 октября. Больна 13-й день. Температура до 38,3 поднимается 4 раза в сутки. Сходила в поликлинику за направлением на анализы, узнала, что тест на ПЦР (взятый на 9-й день болезни с нарушением требования для сдачи) – отрицательный.
2 октября. Больна 14-й день. Температура поднимается 3 раза в день до 37,9.
3 октября. Больна 15-й день. Температура поднимается 3 раза в день до 37,9.
4 октября. Больна 16-й день. Сдала общий анализ крови и на гормоны щитовидной железы. Попала на прием к Дрыгину. Пока сидела в коридоре, поднялась температура. Температура 37.1, мерили в кабинете 20. На приеме у терапевта. Снова рассказала, когда и где заболела, чем лечилась, какие были симптомы. Что связываю свое заболевание с инфекцией в магазине, т.к. сотрудник магазина очень сильно кашлял. Попросила направление на рентген. Терапевт написал в медкарте что я больна 2-ой день и связываю, свое заболевание с переохлаждением. ЭТО ЛОЖЬ! Записи врача, сделанные в карточке, не соответствуют действительности. Явно чужие. Назначил колоть антибиотики цифтриаксон еще 5 дней.
Ложноположительный ПЦР: Почему так бывает?
По словам доктора медицинских наук, главная проблема в том, что тест-система видит фрагменты не только живых вирусных частиц.
Фото © ТАСС / Ковалев Пётр
Чаще всего ПЦР-тест показывает ложноположительный результат из-за наличия в носу или ротоглотке фрагментов уже погибшего вируса, рассказал в интервью Лайфу доктор медицинских наук, практикующий врач, профессор Антон Ершов.
Это бывает, если человек переболел, может быть, даже несколько недель или месяца полтора тому назад, но у него остались не целые вирусные частицы, а разрушенные части вируса. В том числе РНК его разрушенное. И делаем мазок из носо- и ротоглотки и обнаруживаем там РНК. Лабораторному исследованию всё равно, это РНК живого вируса или РНК убитого вируса. И очень много таких случаев, на самом деле
Доктор медицинских наук, практикующий врач, профессор
» ratio=»1/1″ src=»https://static.life.ru/publications/2021/4/17/1607933213454.3276.jpg» loading=»lazy» />
» ratio=»1/1″ src=»https://static.life.ru/publications/2021/4/17/1607933213454.3276.jpg» loading=»lazy» />
Он объяснил, что у разных людей с разной скоростью обновляются клетки слизистой оболочки носоглотки и ротоглотки, и у некоторых части погибшего SARS-Cov-2 сохраняются в верхних дыхательных путях по несколько недель.
У меня есть случаи, когда пациент был два с половиной месяца ложноположительный по ПЦР, это было в первую волну. И представляете, он измучился, не мог с карантина выйти
Доктор медицинских наук, практикующий врач, профессор
» ratio=»1/1″ src=»https://static.life.ru/publications/2021/4/17/1607933213454.3276.jpg» loading=»lazy» />
» ratio=»1/1″ src=»https://static.life.ru/publications/2021/4/17/1607933213454.3276.jpg» loading=»lazy» />
По словам практикующего врача, понять, что результат теста ложноположительный, можно на двух основаниях: отсутствие каких-либо симптомов болезни и как минимум два отрицательных ПЦР-теста в следующие несколько дней.
Просто делаем нормальную санацию слизистой, очищаем её от этого всего, промываем и так далее — и потом дважды пациент ПЦР сдаёт, и он отрицательный
Доктор медицинских наук, практикующий врач, профессор
» ratio=»1/1″ src=»https://static.life.ru/publications/2021/4/17/1607933213454.3276.jpg» loading=»lazy» />
» ratio=»1/1″ src=»https://static.life.ru/publications/2021/4/17/1607933213454.3276.jpg» loading=»lazy» />
Кроме того, иногда тест находит ковидные РНК у здорового человека в тот момент, когда вирус только что оказался на слизистой оболочке и ещё не успел там обосноваться, добавил профессор.
Я вакцинирован, причём с хорошим титром, и не заражусь. Хожу к людям, которые на меня чихают коронавирусом, и тут же в течение получаса иду сдавать ПЦР. И он у меня засветится, потому что именно в этот момент во мне был вирус. Но он скорее даже не ложноположительный, он транзиторно там оказался
Доктор медицинских наук, практикующий врач, профессор
» ratio=»1/1″ src=»https://static.life.ru/publications/2021/4/17/1607933213454.3276.jpg» loading=»lazy» />
» ratio=»1/1″ src=»https://static.life.ru/publications/2021/4/17/1607933213454.3276.jpg» loading=»lazy» />
Врач также отметил, что чаще результаты ПЦР оказываются ложноотрицательными, а не ложноположительными. По его словам, даже у ещё болеющих ковидом ПЦР уже может не обнаруживать ковид, поскольку вирус продвинулся в нижние дыхательные пути и в верхних его уже нет.
14.4. Предупреждение ложноположительных и ложноотрицательных результатов ПЦР
Ложноположительные и ложноотрицательные результаты ПЦР – серьезная и часто недооцениваемая проблема, являющаяся оборотной стороной исключительно высокой чувствительности метода.
Причинами ложноположительных результатов являются следующие три вида контаминации:
Первые две формы контаминации легко устраняются при соблюдении известных мер предосторожности. В целях исключения ложноположительных результатов подготовку исследуемого материала, проведение ПЦР и анализ результатов амплификации необходимо проводить в отдельных помещениях. Реакционная смесь ПЦР должна храниться в стерильной посуде при –20 °С. Для работы используются только стерильные одноразовые пробирки и наконечники для пипеток. Необходимо проводить регулярную обработку рабочих мест ультрафиолетовыми лучами и 0,3% раствором HCl.
На каждом этапе работы (выделение ДНК, проведение амплификации, электрофоретический анализ полученных результатов) необходимо использовать собственные лабораторные контроли и периодически применять зашифрованные отрицательные и положительные контрольные образцы для оценки специфичности и чувствительности ПЦР-генодиагностических исследований. При каждой постановке ПЦР рекомендуется применять отрицательные контроли: на процедуру экстракции, буферный раствор, праймеры (пробирки, не содержащие ДНК-матрицы) («Методические рекомендации по проведению работ в диагностических лабораториях, использующих метод полимеразной цепной реакции», ГКСЭН РФ, утверждены 22 июня 1995 г.).
Наиболее серьезную проблему для преодоления представляет контаминация ампликоном. В настоящее время существует несколько методов инактивации продуктов ПЦР. Различают предамплификационную и послеамплификационную инактивацию. Метод инактивации продуктов ПЦР предамплифика-ционным облучением основан на известной способности коротких волн УФ-света вызывать образование димеров тимиди-на и другие ковалентные модификации в молекулах ДНК. Основными преимуществами метода являются простота выполнения и отсутствие затрат. Эффективность инактивации ультрафиолетовым облучением находится в зависимости от длины и нуклеотидного состава ДНК-мишени. Установлено, что короткие ампликоны (менее 300 пар оснований) инактивируются не полностью.
Одним из вариантов химической инактивации продуктов ПЦР является гидролиз праймеров. В этом случае используют праймеры, содержащие на конце 3′ одно рибозное звено или более. В результате образуются ампликоны, содержащие фос-фатилированную рибозу, чувствительную к щелочному гидролизу. При добавлении NaОН к продукту ПЦР происходит удаление рибозных остатков праймеров из ампликонов. Модифицированные таким образом ампликоны не могут служить эффективными мишенями при проведении последующих амплификации.
Другой вариант химической инактивации продуктов ПЦР основан на способности гидроксиламина вызывать ковалентные модификации ДНК. Гидроксиламин избирательно реагирует с атомами кислорода в остатках цитозина, образуя ковалентные связи, что предохраняет от формирования пар с остатками гуанидина. Тем самым происходит модификация сайтов праймеров на последовательности мишени. Показано, что данный метод особенно эффективен для инактивации коротких ампликонов с высоким содержанием GС-пар.
Метод энзиматической инактивации продуктов ПЦР основан на функции фермента урацил-N-глюкозидазы удалять остатки урацила, образуя спонтанную деаминацию цитозина в двунитевой ДНК. При проведении амплификации один из дезоксинуклеотидтрифосфатов дТТФ заменяется дУТФ, который также служит субстратом для Тaq-полимеразы. В результате происходит накопление ампликонов, содержащих остатки дезоксиурацила. Урацил-N-глюкозидаза, вносимая в реакционную смесь до амплификации, удаляет остатки урацила в ампликонах-контаминантах. Происходит образование сайтов, высокочувствительных к щелочному гидролизу при повышенных температурах. В связи с тем, что ПЦР обычно проводят в условиях слабощелочных рН и высоких температур, продукты амплификации, обработанные урацил-N-глюкозидазой, разрушаются. Подобно фотохимической инактивации эффективность энзиматической инактивации зависит от длины ампли-кона и содержания GС-пар. Установлено, что для коротких ампликонов с высоким содержанием GС-пар метод энзиматической инактивации эффективнее, чем ультрафиолетовое облучение или фотохимическая обработка.
Быстрая экстракция ДНК или РНК из различных материалов, анализирующихся методом ПЦР. Процедура подготовки пробы включает лизис микроба и экстракцию нуклеиновой кислоты. С целью разрушения микробной стенки используют простое кипячение, замораживание-оттаивание в присутствии лизоцима, а также специальные лизирующие буферы, содержащие детергенты и протеиназу К. Для экстракции ДНК используют различные модификации двух основных методов. Первый представляет собой классическую процедуру фенольно-хлоро-формной экстракции, при которой достигается хорошая очистка ДНК, в первую очередь от ингибиторов Тая-полимеразы, но при этом неизбежны большие потери нуклеиновой кислоты, особенно заметные при работе с образцами небольшого объема с низкой концентрацией идентифицируемого агента. Второй способ, применяемый для очистки нуклеиновой кислоты, основан на использовании нуклеосорбентов. Подготовка материала с применением нуклеосорбента занимает меньше времени и более проста в исполнении, хотя не всегда может гарантировать удаление возможных ингибиторов.
Работа должна производиться в лабораторной одежде, сменяемой при переходе из одного помещения в другое, и в одноразовых перчатках, так как анализируемые биопробы являются потенциально инфицированным материалом. Обработка одежды из разных помещений должна производиться раздельно. Желательно, чтобы на разных этапах проведения ПЦР-анализа работали различные сотрудники.
Следует использовать отдельные наборы полуавтоматических пипеток, предназначенные для различных стадий анализа и не переносимые из одного помещения в другое.
Все этапы работы необходимо проводить только с использованием одноразовых расходных материалов: наконечников для микропипеток, пробирок, перчаток и т.д. Обязательно менять наконечники при переходе от пробы к пробе, желательно использовать наконечники с фильтром – аэрозольным барьером для предотвращения попадания микрокапель раствора в пипетку. Использованные пробирки и наконечники должны сбрасываться в специальные контейнеры или емкости, содержащие дезинфицирующий раствор (1N соляная кислота, 10 % гипохлорит натрия или 10 % хлорная известь).
Клинические образцы следует хранить отдельно от реагентов.
Рабочие поверхности, оборудование и материалы следует облучать ультрафиолетом с длиной волны (л) 260 нм. Облучение необходимо проводить в течение 1 ч после окончания работы.