Гистохимия: методы Гистохимические методы: введение Буферные растворы и их приготовление Выявление нуклеиновых кислот Выявление (суммарное) белков Гистохимические методы для полисахаридов и протеидов Окрашивание жиров и липидов Металлы, анионы, экзогенные пигменты Гистохимия ферментов Гистохимия нервной системы
Окрашивание жиров и липидов
Термин «липиды» собирательный. Им обозначают все жироподобные вещества, экстрагируемые растворителями жиров (бензин, эфир, хлороформ и др.).
В основе методов окрашивания лежат чисто физические процессы. Суть их заключается в том, что вещества, красящие жиры, хорошо в них растворяются и поэтому легко переходят из раствора в липиды.
Окрашивание Суданом III.
Является наиболее распространенным методом выявления жира.
Приготовление раствора красителя.
В 100 мл горячего 70% спирта засыпают 0,2—0,3 г порошка судана III, несколько раз взбалтывают и ставят в термостат (при58°С) на несколько часов, затем охлаждают и фильтруют.
1. Замороженные срезы (из свежей или фиксированной в формалине ткани) на несколько минут переносят из воды в 50% спирт.
2. Помещают в спиртовой раствор красителя на 15—30 мин (бюксы следует закрывать, так как испарение спирта приводит к выпадению осадков красителя).
3. Быстро ополаскивают в 50% спирте.
4. Промывают в дистиллированной воде.
5. Подкрашивают ядра кислым гемалауном.
6. Промывают и заключают в желатин или глицерин-желатин (обезвоживание в спиртах
Жировые вещества интенсивно оранжевого цвета, ядра —»синие. Препараты выцветают сравнительно скоро, поэтому откладывать исследование не рекомендуется.
в смесь из 50мл ацетона и 50 мл 70% спирта засыпают 0,2—0,3 г шарлаха. Хорошо закрывают и взбалтывают. Полученный раствор перед употреблением фильтруют.
1. Замороженные срезы из свежей или фиксированной в формалине ткани помещают в 50% спирт на 2—4 мин.
2. Окрашивают в растворе красителя 2—3 мин.
3. Быстро ополаскивают в 70% спирте.
4. Промывают в воде.
5. Подкрашивают ядра кислым гемалауном.
6. Промывают в воде и заключают в глицерин или глицерин-желатин.
Об актуальных изменениях в КС узнаете, став участником программы, разработанной совместно с АО «Сбербанк-АСТ». Слушателям, успешно освоившим программу выдаются удостоверения установленного образца.
Программа разработана совместно с АО «Сбербанк-АСТ». Слушателям, успешно освоившим программу, выдаются удостоверения установленного образца.
Методические указания МУК 4.1.2483-09 «Определение непищевых красителей судан I, судан II, судан III, судан IV и para red в пищевых продуктах и биологически активных добавках к пище»(утв. руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защите прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации Г.Г. Онищенко 5 февраля 2009 г.)
Методические указания МУК 4.1.2483-09 «Определение непищевых красителей Судан I, Судан II, Судан III, Судан IV и Para Red в пищевых продуктах и биологически активных добавках к пище» (утв. руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом РФ Г.Г. Онищенко 5 февраля 2009 г.)
Дата введения: с момента утверждения
Введение
Необходимость определения непищевых красителей Судан I-IV и Para Red (Пара Ред) обусловлено их использованием при фальсификации специй и пряностей, а также продуктов их переработки, БАД к пище, изготовленных с использованием специй и пряностей, и других пищевых продуктов, в состав которых входят специи и пряности, с целью придания им более интенсивной окраски.
1. Общие положения и область применения
1.1. Настоящие методические указания устанавливают методику определения возможного присутствия непищевых красителей Судан I-IV и Para Red в пищевых продуктах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в специях, пряностях и продуктах их переработки, а также в биологически активных давках# к пище (БАД) и других пищевых продуктов (в состав которых входят специи и пряности).
1.2. Методические указания предназначены для органов и организаций Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, осуществляющих контроль качества и безопасности продовольственного сырья и пищевых продуктов, находящиеся в обращении на территории Российской Федерации, в т.ч. импортируемых в Российскую Федерацию, а также могут быть использованы другими лабораторными центрами, осуществляющими контроль качества и безопасности пищевых продуктов и аккредитованными в установленном порядке.
1.3. Присутствие непищевых красителей Судан I-IV и Para Red в пищевых продуктах в пределах обнаружения данным методом является основанием для запрещения продукции к реализации.
2. Краткая характеристика красителей Судан I, Судан II, Судан III, Судан IV и Para Red (Пара Ред)
Судан I, Судан II, Судан III, Судан IV и Para Red (Пара Ред) являются синтетическими непищевыми красителями, практически нерастворимыми в воде, хорошо растворимыми в органических растворителях (хлороформе, ацетоне, эфире), и имеющих интенсивную окраску от оранжевого до ярко-красного цвета. Структура непищевых красителей Судан I-IV и Para Red приведена на рис. 1.
Рис. 1 Структура непищевых красителей Судан I-IV и Para Red (Пара Ред).
3. Принцип метода определения красителей Судан I-IV и Para Red
Параметры масс-детектирования представлены
4. Средства измерения, материалы и реактивы
— Высокоэффективный жидкостной хроматограф.
— Хроматографическая колонка C18, *, 4,6×250 мм.
— Весы лабораторные общего назначения с пределом взвешивания 100 г и погрешностью +0.0001 г.
— Установка для фильтрования и дегазирования подвижной фазы.
— Центрифуга лабораторная ОПН-8 8000 об/мин.
— Мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.
— Пипетки 2-1-2-1 или 1-1-2-1, 2-1-2-10 или 2-2-2-10 или 3-2-2-10 по ГОСТ 29227.
— Колбы мерные К 1-50-1, К 1-50-2 по ГОСТ 1770-74.
— Ацетонитрил для жидкостной хроматографии.
— Тетрагидрофуран для жидкостной хроматографии.
— Трифторуксусная кислота квалификации «ОСЧ».
— Ацетон квалификации «ХЧ».
5. Определение содержания Суданов I-IV и Para Red методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
5.1. Подготовка стандартных растворов
Навеску стандартного вещества около 0,02 г (с точностью 0,0001 г) помещают в мерную колбу на 100 мл, добавляют 30 мл 95% этанола, интенсивно встряхивают, при необходимости озвучивают на ультразвуковой бане до полного растворения вещества. После этого объем доводят до метки 95% этанолом (основной раствор). В мерную колбу на 50 мл помещают 1 мл основного раствора и доводят объем до метки 95% этанолом (рабочий раствор). Полученный рабочий раствор фильтруют через фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.
Приготовленные стандартные растворы хранят в прохладном месте в течение 1 месяца.
5.2. Подготовка проб для анализа
Около 1,0 г (точная навеска) образца помещают во флакон, объемом 20 мл с завинчивающейся крышкой, добавляют 10 мл ацетона, интенсивно встряхивают в течение 2 минут и озвучивают на ультразвуковой бане в течение 5 минут. После озвучивания образец снова встряхивают и центрифугируют на 6000 об/мин. После центрифугирования супернатант отбирают и исследуют. При необходимости отобранный супернатант фильтруют через фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.
При подготовке контрольных образцов указанным способом извлекается более 95% добавленного количества каждого из исследуемых красителей.
5.3. Приготовление подвижной фазы
При постоянном перемешивании к бидистиллированной воде добавляют по каплям трифторуксусную кислоту до рН=2,4 и фильтруют через фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.
Подвижная фаза хранится в холодильнике при температуре 2-8 С не более 3 месяцев.
5.4. Проведение анализа ВЭЖХ
Идентификацию компонентов на хроматограмме осуществляют путем сравнения со временем удерживания стандарта красителя, УФ и видимого спектра. Для подтверждения рекомендуется сравнивать также молекулярные массы каждого компонента и его дочерних ионов.
Идентификация красителей Судан I-IV и Para Red только по времени удерживания не будет являться достоверной, ввиду сложного матрикса исследуемых объектов, и наличия природных компонентов, обладающих сходными спектральными характеристиками и хроматографическим поведением.
5.5. Условия хроматографического анализа:
Колонка * С18(2), *, 4,6х250 мм
Приготовление подвижной фазы: бидистиллированную воду доводят трифторуксусной кислотой до рН 2,4 (мл на 1 л бидистиллированной воды)
В случае использования только диодно-матричного детектора вместо бидистиллированной воды, подкисленной трифторуксусной кислотой до рН=2,4 допускается использование бидистиллированной воды. Также возможно использование изократического элюирования смесью ацетонитрила-бидистиллированной воды с содержанием ацетонитрила 90-95% (в зависимости от параметров колонки).
Для полной регенерации колонки следует использовать подвижную фазу на основе тетрагидрофурана, обладающего такой же элюирующей силой, как и ацетон.
Скорость подачи подвижной фазы: 1,0 *
Объем вводимой пробы 5 мкл.
Порядок выхода и параметры количественного определения непищевых красителей Судан I-IV и Para Red приведены в таблице 2. Пример хроматограммы смеси стандартов Судан I-IV и Para Red представлен на рисунке 2.
Проведение количественного определения красителей Судан I-IV и Para Red не является обязательным, т.к. их применение в пищевых продуктов не допускается, поскольку они являются не пищевыми веществами, и их присутствие в пределах обнаружения данного метода является основанием для запрещения продукции к реализации. Пределы обнаружения красителей Судан 1-4 и Пара Ред приведены в Таблице 2.
Пределы обнаружения непищевых красителей Судан 1-4 и Пара Ред в специях, пряностях, продуктах их переработки и БАД к пище.
Количественное определение*
Количественное определение проводят абсолютной градуировкой.
Содержание красителей Судан I-IV и Para Red проводят по следующей формуле:
Основные метрологические показатели
Параметры определения непищевых красителей Судан I-IV и Para Red
Рис. 2. Пример хроматограммы смеси стандартов Судан I-IV и Para Red.
* проведение количественного определения красителей Судан I-IV и Para Red не является обязательным, т.к. их применение в пищевых продуктов не допускается.
Методические указания МУК 4.1.2483-09 «Определение непищевых красителей Судан I, Судан II, Судан III, Судан IV и Para Red в пищевых продуктах и биологически активных добавках к пище» (утв. руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом РФ Г.Г. Онищенко 5 февраля 2009 г.)
Текст документа приводится по официальному изданию (Москва, 2009 г.)
Дата введения: с момента утверждения
1. Методические указания разработаны ГУ НИИ питания РАМН (академик РАМН В.А. Тутельян, к.т.н. В.Г. Байков, к.х.н. В.В. Бессонов, Ю.В. Ведищева, к.ф.н. О. И. Передеряев., Е.П. Хромченкова)
2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол N 3 от 25.12.2008)
3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защите прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 05.02.2009
В нашей летней викторине был вопрос о красителях для окраски липидов. Расскажем о двух из них: Судан чёрный и Судан III по Герксгеймеру. Оба красителя используются для окрашивания липидов в замороженных срезах.
Как нужно проводить окраску? 1) Срез, полученный на замораживающем микротоме, перенести в 95° этанол. 2) При окраске Суданом III По Герксгеймеру: Поместить в раствор Судана III на 10. При окраске Суданом чёрным: Поместить в раствор Судана чёрного на 7-10 минут. 3) Быстро дифференцировать в 95° этаноле. 4) Промыть в дистиллированной воде. 5) Заключить в водную монтирующую среду.
Результаты: При окраске Суданом III По Герксгеймеру: липиды от оранжевого до красного. При окраске Суданом чёрным: липиды от тёмно-зеленого до чёрного.
Стоит ли говорить, что при окрашивании липидов удобнее всего использовать наборы красителей. Кто-то из вас ими пользуется? Напишите о своём опыте в комментариях!
🖌Как нужно проводить окраску? 1) Срез, полученный на замораживающем микротоме, перенести в 95° этанол. 2) При окраске Суданом III По Герксгеймеру: Поместить в раствор Судана III на 10. При окраске Суданом чёрным: Поместить в раствор Судана чёрного на 7-10 минут. 3) Быстро дифференцировать в 95° этаноле. 4) Промыть в дистиллированной воде. 5) Заключить в водную монтирующую среду.
Результаты: ➡При окраске Суданом III По Герксгеймеру: липиды от оранжевого до красного. ➡При окраске Суданом чёрным: липиды от тёмно-зеленого до чёрного.
Стоит ли говорить, что при окрашивании липидов удобнее всего использовать наборы красителей. Кто-то из вас ими пользуется? Напишите о своём опыте в комментариях!
🖌Как нужно проводить окраску? 1) Срез, полученный на замораживающем микротоме, перенести в 95° этанол. 2) При окраске Суданом III По Герксгеймеру: Поместить в раствор Судана III на 10. При окраске Суданом чёрным: Поместить в раствор Судана чёрного на 7-10 минут. 3) Быстро дифференцировать в 95° этаноле. 4) Промыть в дистиллированной воде. 5) Заключить в водную монтирующую среду.
Результаты: ➡При окраске Суданом III По Герксгеймеру: липиды от оранжевого до красного. ➡При окраске Суданом чёрным: липиды от тёмно-зеленого до чёрного.
Стоит ли говорить, что при окрашивании липидов удобнее всего использовать наборы красителей. Кто-то из вас ими пользуется? Напишите о своём опыте в комментариях!
Окрашивание жира Суданом, по-видимому, основано на растворении краски в жире. Окрашивание жира Суданом не является специфичным. Одновременно окрашиваются в оранжево- розовый цвет эфирные масла, кутин, суберин, воск и смолы. Жидкие жиры окрашиваются в течение 5-10 мин, твердые жиры и кристаллы жирных кислот окрашиваются очень медленно.
Растворы Судана различной концентрации.
Приготовление растворов. Первый раствор: 0,01 г судана III развести в 5 мл 96%-ного спирта и добавить 5 мл глицерина. Второй раствор: 0,1 г Судана III развести в 20 мл 70-90%-ного спирта.
1. Поместить срез на 10-20 мин в один из названных реактивов.
2. Перенести срез в глицерин.
3. Наблюдать окрашенные капли жира.
Результаты реакции (табл. 8)
Зародыш кукурузы очень быстро окрашивается в ярко-оранжевый цвет. Эндосперм остается бесцветным.
При малом увеличении микроскопа заметно, что содержимое клеток зародыша имеет ярко-оранжевый цвет. Оболочки клеток бесцветны. Клетки алейронового слоя также ярко окрашены.
При большом увеличении микроскопа видно, что в клетках зародыша находится множество окрашенных капель жира различных размеров. В эпителии щитка, в корешке и почечке жировые капли очень мелкие. В толще щитка и в клетках алейронового слоя наряду с мелкими встречаются крупные капли жира. Эндосперм жира не содержит.
Судан — группа нейтральных жирорастворимых красителей. Общая формула: C22H16N2O
Существует несколько типов с разными заместителями: Судан I, Судан II, Судан III, Судан IV, Sudan Para Red (Пара Ред), Судан Чёрный. В сферах экономики используются при производстве дизельного топлива, в легкой промышленности для окрашивания тканей, а также при проведении биохимических исследований для окрашивания препаратов, и относятся к непищевым красителям. Часто используются при фальсификации специй и пряностей, а также продуктов их переработки, БАД к пище, изготовленных с использованием специй и пряностей, и других пищевых продуктов, в состав которых входят специи и пряности, с целью придания им более интенсивной окраски. В химии и медицине используется для качественного определения жиров и покраске гистологических проб.
• Судан I — краситель жёлтого цвета.
• Судан II — краситель оранжевого цвета.
• Судан III — краситель оранжево-красного цвета.
• Судан IV — краситель тёмно-красного цвета.
Литература
Полезное
Смотреть что такое «Судан (краситель)» в других словарях:
Судан (значения) — Судан: Судан историческое название обширного региона в Африке, к югу от Сахары. Его части: Западный Судан, где, в частности, находилась колония Французский Судан (ныне Республика Мали) Центральный Судан Восточный Судан Республика… … Википедия
Жёлтый «солнечный закат» — Общие … Википедия
Паренхиматозные дистрофии — нарушения метаболизма в паренхиме органов. Паренхима органа совокупность клеток, обеспечивающих основные его функции (например, кардиомиоциты паренхиматозные элементы сердца, гепатоциты печени, нейроны головного и спинного мозга). Паренхиму… … Википедия
мастичная реакция — (син.: Эмануэля реакция, Якобсталя Кафки реакция) метод диагностики некоторых болезней нервной системы по изменению коллоидных свойств цереброспинальной жидкости, основанный на обесцвечивании ее смеси со спиртовым раствором вяжущего вещества… … Большой медицинский словарь
Масти́чная реа́кция — (син.: Эмануэля реакция, Якобсталя Кафки реакция) метод диагностики некоторых болезней нервной системы по изменению коллоидных свойств цереброспинальной жидкости, основанный на обесцвечивании ее смеси со спиртовым раствором вяжущего вещества… … Медицинская энциклопедия
ДОБАВКИ — вводятся в пищ. продукты с целью улучшения технол. процесса произ ва, структуры, физ. хим. и органолептич. св в, увеличения сроков хранения, повышения биол. и пищ. ценности. К ним относят синтетич. и прир. консерванты, антиоксиданты, окислители,… … Химическая энциклопедия
(1).jpg "судан 3 окраска для чего. Смотреть фото судан 3 окраска для чего. Смотреть картинку судан 3 окраска для чего. Картинка про судан 3 окраска для чего. Фото судан 3 окраска для чего")
Как нужно проводить окраску?
При окраске Суданом III По Герксгеймеру: липиды от оранжевого до красного.
